本應(yīng)用介紹了使用 ibidi μ-Slide 18 孔載玻片培養(yǎng)仁沃，固定和染色貼壁細(xì)胞的簡單方案枝扭。在此示例中劣屑，我們培養(yǎng)了人內(nèi)皮細(xì)胞，用 paraformaldehyde 固定了它們，并對 F-actin 細(xì)胞骨架和表達(dá)α- 微管蛋白的微管進(jìn)行了染色涮凡。細(xì)胞核用 DAPI 復(fù)染拓币。

該應(yīng)用四個主要步驟：

在本應(yīng)用中，使用了以下材料：

  熒光顯微鏡（倒置）琳宽，帶有合適的濾光片組

1. 播種

· 在無菌條件下打開 ibidi μ-Slide 18 孔載玻片 ibiTreat（＃81816）的包裝，并將其放在 μ-Slide 機(jī)架（ibidi＃80003）上弄业。

· 準(zhǔn)備細(xì)胞懸液（1 x 105 細(xì)胞/ ml）泛邮，并在 μ-Slide 18 孔載玻片每個孔中加入 100 μl。

· 用提供的蓋子蓋上腔室辈净。

· 在潮濕的細(xì)胞培養(yǎng)箱（37°C盯质，5％CO2）中培養(yǎng)過夜。對于更長的細(xì)胞培養(yǎng)概而，我們建議幾天后進(jìn)行中等程度的交換呼巷。

2. 固定，滲透和封閉

· 使用細(xì)胞培養(yǎng)抽吸裝置從孔中抽吸細(xì)胞培養(yǎng)基到腥。

· 用 Dulbecco PBS 沖洗細(xì)胞朵逝，方法是將 100 μl 緩慢加入每個孔。

· 用約 100 μl 4％paraformaldehyde 固定細(xì)胞 20 分鐘乡范。

· 用 PBS 沖洗細(xì)胞兩次配名，方法是將 100 μl 緩慢加入每個孔中。

· 除去液體晋辆，并在 PBS 中加入約 100 μl 的 0.1％Triton?X-100渠脉。孵育 10 分鐘。

· 用 PBS 洗滌細(xì)胞,緩慢將 100 μl 加入每個孔中瓶佳。

· 除去液體芋膘，并在 PBS 中加入 100 μl 1％BSA 封閉溶液。孵育 20 分鐘霸饲。

· 用 PBS 洗滌細(xì)胞,緩慢將 100 μl 加入每個孔中凡矿。

3. 染色

· 準(zhǔn)備您的染色和抗體溶液。

· 使用細(xì)胞培養(yǎng)抽吸裝置從孔中除去液體置芋。

· 將 100μl 用 PBS 稀釋的一抗（抗-Tubulin 1：1000）稀釋到每個孔中紊竹，并在 4°C 下孵育過夜。

· 用 PBS 洗滌細(xì)胞一次栋湃，持續(xù) 10 分鐘壹会。

· 將在 PBS 中稀釋的 100 μl 二級抗體混合物（抗小鼠 IgG-Atto594 1：500 和 LifeAct-TagGFP2 蛋白 30 μg / ml）稀釋到每個孔中，并在室溫下于黑暗中孵育 3 小時铲桑。

· 用 PBS 洗滌細(xì)胞兩次及键，每次 10 分鐘盖赛。

· 吸出 PBS，并在每個孔中加入約 100 μl 含 DAPI 的 ibidi 封固劑胸胚。使用滴管瓶滴加安裝介質(zhì)甜届。

4. 顯微鏡觀察

· 在熒光顯微鏡下用合適的濾光片組觀察細(xì)胞，并可選擇用 ibidi 浸油（＃50101）觀察細(xì)胞窄忱。

· （可選）覆蓋圖像以創(chuàng)建合并圖像岛涝。

5. 結(jié)果

接種在 μ-Slide 18 孔載玻片 ibiTreat 中脓杉，物鏡 60x糟秘，油浸后 24 小時后的 HUVEC（人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞）。

綠色：F-肌動蛋白（LifeAct-TagGFP2 蛋白）

紅色：微管蛋白（單克隆抗 α-Tubulin 抗體球散，小鼠+抗小鼠 IgG-Atto594）藍(lán)色：核仁（使用具有 DAPI 的 ibidi Mounting Medium 進(jìn)行 DAPI 染色）

在本應(yīng)用中使用的 ibidi μ-Slide 18 孔載玻片帶有 18 個孔的小室蓋玻片尿赚，用于細(xì)胞培養(yǎng)，免疫熒光和高端顯微鏡檢查蕉堰，它具有以下特點：

• 多合一 18 孔腔載玻片凌净，用的細(xì)胞數(shù)量少，試劑量少的經(jīng)濟(jì)高效實驗
• 顯微鏡載玻片非常適合通過最高光學(xué)質(zhì)量的 1.5 號聚合物蓋玻片底部進(jìn)行高分辨率成像
• 適用于各種顯微鏡技術(shù)（例如 DIC屋讶，寬場熒光冰寻，共聚焦顯微鏡，雙光子顯微鏡皿渗，F(xiàn)RAP斩芭，F(xiàn)RET，F(xiàn)LIM和  LSFM）的細(xì)胞培養(yǎng)室